HI實(shí)驗(yàn)在臨床工作中應(yīng)用廣泛，結(jié)果判定快速，操作方法簡(jiǎn)單實(shí)用。但可能受一些因素影響，使得試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，從而無(wú)法指導(dǎo)生產(chǎn)，因此對(duì)在實(shí)際操作中有可能出現(xiàn)的誤差進(jìn)行分析。
1. 4單位抗原的配制
病毒的血凝價(jià)需準(zhǔn)確，現(xiàn)用現(xiàn)配，在抗體測(cè)定前做回歸試驗(yàn)。
2.抗原
新抗原分裝后保存，分批使用，可以減少反復(fù)凍融效價(jià)降低，加4單位抗原時(shí)必須邊加邊混勻。
3.稀釋液
根據(jù)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》GB/TI8936-2003進(jìn)行PBS配制，pH為7.0時(shí), 紅細(xì)胞沉降效果最佳。
4.被檢血清
理想的被檢血清是淡黃色液體，無(wú)污染、無(wú)雜質(zhì)、無(wú)腐敗變性、無(wú)溶血、無(wú)膠凍樣的物質(zhì)。
5. 1%紅細(xì)胞懸液
離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，轉(zhuǎn)速過(guò)快導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂，引起溶血。紅細(xì)胞離心后粘稠度高，可采用反向移液法配制以確保足夠的紅細(xì)胞量，避免出現(xiàn)跳孔。濃度過(guò)高，沉降點(diǎn)過(guò)大，血凝抑制價(jià)上升，濃度過(guò)低，沉降點(diǎn)過(guò)小，血凝抑制價(jià)下降。同一批次的血清樣品不宜更換不同批次的紅細(xì)胞，邊加邊混勻。從最后一孔開(kāi)始加紅細(xì)胞,滴頭避免接觸孔內(nèi)液體，影響結(jié)果。
6. 其它因素
6.1 器材
96 孔V型板比U型板的實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定更準(zhǔn)確。吸頭一次性使用，及時(shí)更換可避免污染。使用微量移液器速度不宜過(guò)快，加樣時(shí)懸滴。稀釋樣品不宜產(chǎn)生氣泡，吸頭不宜緊貼孔底，注意慢吸快打，吸頭內(nèi)不留液體。振蕩器振蕩時(shí)間不宜太長(zhǎng)或強(qiáng)度太大，避免紅細(xì)胞破裂。
6.2實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度
溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，結(jié)果出現(xiàn)快，使整板無(wú)凝集現(xiàn)象，使得結(jié)果誤判。